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 实验室工程

实验室工程
内蒙古PCR实验室建设
    发布时间: 2020-05-29 09:52    

一、PCR实验室平面布局

PCR实验室布局图

PCR实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配置和扩增区、扩增产物分析区,为了避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区,各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。

二、实验室空调通风系统设计及压力控制

试剂配制室及样品处理室宜呈微正压,以防外界含核酸气溶胶的空气进入,造成污染;可以通过控制进风风量大于排风风量达到正压效果。

核酸扩增室及产物分析室应呈微负压,以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品,可以通过控制排风风量大于进风风量达到负压效果。

PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为了避免各个实验区域间交叉感染的可能性,通风方式应为机械通风,不应自然通风,且不宜使用循环风。同时要严格控制送、排风比例以保证各试验区的压力要求。

PCR实验室的空气流向应按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区进行,防止扩增的产物顺空气气流进入扩增前的区域。可选择负压排风装置,核心区域相对于相邻区域最小压不小于-10Pa。也可通过安装排气扇或者其他方式实现。PCR实验室要求温度18~26℃,相对湿度30%~70%。


三、1 实际贮存和准备区

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PCR实验室主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装盒主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送到这个区,不得经过其他区域。试剂原料必须贮存在本区内,并再本区内制备成所需的贮存试剂。该区对与气流压力的控制没有严格的要求。

三、2 标本制备区

该区域主要进行的操作为样本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入值扩增反应管和测定DNA的合成。压力梯度要求为:相对领巾区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染,另外由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应避免在本区内不必要的走动。

三、3 扩增反应混合物配制和扩增区

该区域主要进行的操作为DNA扩增,此外,已制备的DNA模板(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可以在本区内进行。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的布必要走动,个别操作如加样等应在超净台内进行。

三、4 扩增产物分析区

该区域主要进行的操作为扩增片段的测定,本区是zui主要的扩增产物污染来源,因此对本区的压力梯度要求为相对邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其他区域。

四、污染的预防与控制

PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染,在试剂工作中,常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然基因组DNA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。一旦发生污染,实验就必须停止,直到找到污染源为止,而且实验结果必须作废,需要重新进行实验,所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐,浪费人力物力。因此要避免污染,首先应该是预防,而不是排除。

四、1 工作区域的严格划分

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1、各个实验区域设置合理;

2、各个实验区域要有明显的标记(如醒目的门牌或不同颜色的地面等等),以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。

四、2 合理的系统设置

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1、合理的空调通风系统设置,尽量采用全送全排的空调系统;

2、严格的气流压力控制,保证不同的实验区内不同的压力要求。

四、3 规范的操作和严格的管理

.进入各工作区域应当按照单一方向进行,即试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区。

2.各区域的设备、清洁用具标记明确,不得混用。

3.各区域的衣服用不同颜色标记,离开各区域时不得将工作服带出。

4.试验台用移动式紫外线灯消毒,高度60-90cm。扩增区延长照射时间,最好是过夜照射。同时各区域还需安装悬挂式紫外线灯管。

5.各试验区尽量避免不必要的走动和进出,减少交叉感染风险。

6.扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质,应特别注意实验人员的安全防护。

7.试剂储存和准备区:本区域对压力没有明确要求,储存试剂和用于标本制作的消耗品等材料应当直接运送至该区,不得经过其他区域;试剂盒中的阳性对照品及质控品不应当保存在该区,应保存在标本处理区。

8.标本制备区:相对于临近区域应为正压,以避免临近区域进入本区的气溶胶污染。

9.扩增区:相对于临近区应为负压,为避免气溶胶所致的污染,应当尽量减少在本区域内的走动。必须注意的是,所有经过检测的反应管不得在此区域打开。

10.扩增产物分析区:相对于临近区域应为负压。本区域是最主要的扩增产物来源,因此必须注意避免通过本区域扥物品带出。废液必须收集至1mol/L的HCl中,并且不能在实验室内倾倒,而应在远离实验室的地方倒掉。用过的吸头也必须放至1mol/L的HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序处理,如焚烧等。本区域需要配置高压灭菌锅用以灭活扩增后的标本。



 
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